大额牛瘤胃纤维素酶CMX-1基因的突变体构建及酶学特性研究
劳凤娟1
火登亮1
赖洁微1
久美2
巴桑珠扎3
旦增洛桑3
杨舒黎1
1.佛山大学动物科技学院 广东省动物分子设计与精准育种重点实验室,广东 佛山 5282252.墨脱县兽防站,西藏 林芝 8607003.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所,西藏 拉萨 850009
摘要：试验旨在分析筛选自大额牛瘤胃Fosmid文库的高表达纤维素酶CMX-1的基本酶学性质.为进一步提高该酶的催化效率,采用易错聚合酶链反应(ep-PCR)对CMX-1编码基因进行突变改造.结果显示,试验成功获得突变体基因EMX-1.序列分析表明,EMX-1编码305个氨基酸(aa),理论分子量为34.29 kDa,等电点(pI)为5.70,属于糖苷水解酶家族5(GH5),与GenBank数据库中同源序列的最高相似性为80%.该突变基因可在大肠杆菌BL21中高效表达,并表现出纤维素酶活性.酶学性质分析显示,突变酶EMX-1的最适温度与原始酶CMX-1相同,均为50℃;在该温度下,EMX-1的最适pH值由CMX-1的5.0提高至5.5.在各自对应的最适pH值及50℃条件下,EMX-1的纤维素酶活性为247.76 U/mL,较CMX-1(178.92 U/mL)提高约1.4倍.在40～50℃和pH值3.0～9.0范围内,EMX-1较CMX-1表现出更强的稳定性.研究表明,研究通过ep-PCR技术成功获得了催化性能明显提升的突变酶EMX-1,为反刍动物饲料添加剂的开发提供了新的酶资源.
关键词：大额牛纤维素酶基因易错聚合酶链反应突变体酶学特性
分类号：S816.7(普通畜牧学)
资助基金：广东省现代农业产业技术体系创新团队建设项目(2024CXTD13)西藏自治区重点研发计划项目(XZ202301ZY0008N)西藏自治区重点研发计划项目(QYCX2024-04)西藏自治区区域科技协同创新专项项目(SNQYKJXT-03)西藏自治区区域科技协同创新专项项目(QYXTZX-RKZ2025-04-4)
论文发表日期：2025-12-28
在线出版日期：2026-01-31（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 79-84 )
英文信息