菟丝子总黄酮抑制激素性股骨头坏死的成骨细胞凋亡

赵宇; 薛云; 黄家俊; 吴迪友; 杨彬; 黄俊卿

doi:10.12307/2026.195

摘要：背景:PI3K/Akt通路作为一种胞内细胞转导通路,对于细胞增殖、生长与代谢的调控都有着密切的关系.菟丝子作为补肾中药,其总黄酮成分具有潜在骨保护作用,但具体分子机制尚未明确. 目的:通过网络药理学结合体外实验的方式探讨菟丝子总黄酮对地塞米松致成骨细胞凋亡的保护作用及潜在的分子作用机制. 方法:采用网络药理学的方法,对菟丝子治疗股骨头坏死的潜在靶点以及信号通路进行预测分析,并进行细胞学验证.体外培养hFOB1.19细胞,分别用不同质量浓度的菟丝子总黄酮(0,25,50,100,200,400和600 μg/mL)处理24 h,CCK-8法检测细胞存活率,筛选后续菟丝子总黄酮的处理剂量.将hFOB1.19细胞分为对照组、地塞米松组、菟丝子总黄酮各剂量组(分别加入100,200,400 μg/mL菟丝子总黄酮和2 μmol/L地塞米松)及菟丝子总黄酮+LY294002组(加入菟丝子总黄酮400 μg/mL和PI3K 抑制剂LY294002 10 μmol/L)6组.处理结束后,采用CCK-8法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率,免疫荧光测定凋亡相关蛋白表达,DCFH-DA探针测定活性氧水平,Western Blot测定PI3K/Akt通路相关蛋白表达. 结果与结论:①网络药理学结果表明,菟丝子的作用靶点可能与调控肿瘤坏死因子、肿瘤蛋白p53、白细胞介素6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、血管内皮生长因子A、半胱天冬酶3、白细胞介素1β、缺氧诱导因子1α表达以及PI3K/Akt通路有关;②CCK-8结果表明,菟丝子总黄酮在一定范围内能够促进hFOB1.19细胞的增殖,且菟丝子总黄酮能够缓解地塞米松对hFOB1.19细胞增殖的抑制作用;③菟丝子总黄酮能够抑制地塞米松诱导的细胞凋亡和活性氧水平升高,降低Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达以及活性氧水平,增加Bcl-2蛋白表达;④与地塞米松组相比,菟丝子总黄酮能增强p-PI3K和p-Akt蛋白表达;⑤PI3K抑制剂LY294002逆转了菟丝子总黄酮对地塞米松处理细胞凋亡和活性氧水平的影响.结果表明,菟丝子总黄酮能够减弱地塞米松介导的hFOB1.19细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt通路有关.