DOI: 10.12307/2026.793
芦丁促进MC3T3-E1细胞成骨分化:调控中性粒细胞胞外陷阱形成
李杰1
刘洋2
王大禹3
万强3
朱家毅3
冯文俊1
陈锦伦1
揭珂4
黄艺伟5
辛鹏飞6
曾建春1
曾意荣1
张海涛1
1.广州中医药大学第一附属医院,广东省 广州市 5104052.复旦大学,上海市 2004333.广州中医药大学,广东省 广州市 5104054.佛山市中医院,广东省 佛山市 5280005.中山市中医院,广东省 中山市 5284006.上海中医药大学附属光华医院,上海市 200052
摘要：背景:芦丁能够有效抗骨质疏松症,但作用机制尚不明确.
目的:探讨芦丁在中性粒细胞胞外陷阱作用下对MC3T3-E1细胞成骨的影响.
方法:①采用佛波酯刺激人源髓细胞白血病dHL60细胞,体外诱导中性粒细胞胞外陷阱形成.将dHL60细胞分4组进行培养,对照组加入Hank's平衡盐溶液,其余3组均加入50 nmol/L佛波酯;后2组再加入250 μmol/L芦丁或250 μmol/L芦丁和5 U/mL DNaseⅠ.通过流式细胞术检测dHL60细胞凋亡情况,RT-qPCR和Western blot检测中性粒细胞胞外陷阱形成标志性基因和蛋白的表达.②将MC3T3-E1细胞分为6组进行培养:对照组加入Hank's平衡盐溶液,其余5组分别加入50 nmol/L佛波酯;dHL60细胞和50 nmol/L佛波酯;100 μmol/L芦丁;dHL60细胞、50 nmol/L佛波酯和250 μmol/L芦丁;dHL60细胞、50 nmol/L佛波酯、250 μmol/L芦丁和5 U/mL DNaseⅠ.通过流式细胞仪检测在中性粒细胞胞外陷阱作用下MC3T3-E1细胞凋亡情况,碱性磷酸酶染色、茜素红染色明确在中性粒细胞胞外陷阱作用下MC3T3-E1细胞的成骨及矿化能力,RT-qPCR和Western blot检测在中性粒细胞胞外陷阱作用下MC3T3-E1细胞的成骨相关基因和蛋白表达.
结果与结论:①与空白对照组比较,芦丁能够显著抑制dHL60细胞中蛋白精氨酸脱亚胺酶4、髓过氧化物酶和中性粒细胞弹性蛋白酶的mRNA和蛋白表达(P<0.000 1);与芦丁组比较,芦丁与DNaseⅠ联合干预对蛋白精氨酸脱亚胺酶4、髓过氧化物酶和中性粒细胞弹性蛋白酶的下调作用更加明显(P<0.05),说明芦丁能够显著抑制中性粒细胞胞外陷阱的形成;②将dHL60诱导出中性粒细胞胞外陷阱后与MC3T3-E1共培养,MC3T3-E1细胞的Runt相关转录因子2、β-连环蛋白和骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.000 1),凋亡率显著上升(P<0.000 1),说明中性粒细胞胞外陷阱在体外能显著抑制MC3T3-E1细胞的成骨能力,并促进细胞凋亡;在经芦丁单独干预或芦丁与DNaseⅠ联合干预后,中性粒细胞胞外陷阱作用下的MC3T3-E1细胞的凋亡和成骨能力显著改善,且芦丁与DNaseⅠ联合干预的作用较芦丁单独干预更为显著,表明芦丁可能抑制中性粒细胞胞外陷阱的形成,从而改善MC3T3-E1细胞的成骨能力;③分子对接和分子动力学模拟显示,芦丁与蛋白精氨酸脱亚胺酶4、髓过氧化物酶和中性粒细胞弹性蛋白酶靶蛋白的结合作用良好,说明芦丁能够靶向抑制中性粒细胞胞外陷阱的形成.
关键词：芦丁DNaseⅠ骨质疏松症成骨前体细胞中性粒细胞胞外陷阱成骨靶向
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R684(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
论文发表日期：2026-07-08
在线出版日期：2026-03-27（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：11( 4972-4982 )
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