纳米佐剂-抗原共价偶联物中抗原负载率定量方法研究
崔敏萱1
石卓越1
席佳越1
朱钰璞1
马政君2
宋朝君3
范黎1
1.空军军医大学药学系药物化学与药物分析学教研室,陕西西安 7100322.空军军医大学唐都医院超声科,陕西西安 7100383.西北工业大学生命学院,陕西西安 710072
摘要：目的 建立一种纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确定量方法.方法 以PLGA-PEG-COOH共聚物为原料,乳化溶剂挥发法合成PLGA纳米粒子(NPs)作为纳米佐剂,以牛血清白蛋白(BSA)为模型抗原,以1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为交联剂共价交联纳米佐剂与抗原以制备交联NPs.以二喹啉甲酸(BCA)法和考马斯亮蓝染色(Bradford)法为基础并进行改进,采取多种方法测定交联NPs中BSA抗原的A562nm和A595 nm值,排除NPs散射作用对测定造成的干扰,分析测定结果的可靠性与稳定性,建立抗原负载率准确定量方法.结果 交联物中微量的交联剂EDC/NHS可与BCA工作液反应产生强A562nm值,从而干扰BCA法的准确定量;在Bradford法中,空白NPs与Bradford工作液作用产生的A595 nm值来源可拆分如下:A595 nm(空白NPs+Bradford工作液)=A595 nm(空白NPs+PBS缓冲液)+A595 nm(PBS缓冲液+Bradford工作液).因此,交联NPs中抗原的A值可依据下式计算:抗原的A值可依据下式计算:A595 nm(BSA)=A595 nm(交联NPs+Bradford工作液)-A595 nm(交联NPs+PBS缓冲液)-A595 nm(PBS缓冲液+Bradford工作液),实现对交联物中抗原交联率的准确测定.结论 利用Bradford法按A595 nm的来源将纳米佐剂-抗原交联物与Bradford工作液产生的A595 nm值进行拆分可有效排除NPs散射对测定造成的干扰,实现纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确测定.
关键词：纳米佐剂共价交联负载率抗原定量方法
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(82171962)
论文发表日期：2025-11-30
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1442-1449 )
英文信息