抗GDF8单克隆抗体P249337的制备、鉴定及体内促肌肉生长功能研究
于多
谢飞
赵博晨
何磊
李萌
雷小英
空军军医大学药学系生物制药学教研室,陕西西安 710032
摘要：目的 制备性质优良的生长分化因子8(GDF8)单克隆抗体,系统评价其理化性质、体外中和活性及在动物模型中对骨骼肌的促肌肉生长功能.方法 以重组人GDF8蛋白免疫BALB/c小鼠构建杂交瘤细胞库,筛选分泌阳性单克隆抗体的细胞株;应用Protein A亲和层析纯化抗体;SDS-PAGE、高效尺寸排阻色谱及鲎试剂法分别检测抗体纯度、聚合状态及内毒素水平;通过ELISA检测抗体结合活性并计算半效结合浓度(EC50);采用Western blotting检测成肌细胞C2C12中p-SMAD3表达水平评价抗体体外中和能力;取8周龄雄性昆明小鼠按10 mg/kg剂量腹腔注射抗体,每周2次,持续4周,动态监测小鼠体质量、前肢抓力,检测腓肠肌湿质量、肌纤维横截面积,同步检测心功能相关指标;ELISA试剂盒检测血清中GDF8含量.结果 获得可稳定分泌抗GDF8抗体的杂交瘤细胞株GYM329;纯化后抗体P249337的分子组成完整,单体含量≥99％,内毒素含量＜0.1 EU/μg,符合注射用生物制品标准;P249337的EC50为0.069 40 mg/L;在体外可剂量依赖性地阻断C2C12细胞SMAD3的磷酸化;与对照组相比,抗体治疗组小鼠体质量、前肢绝对及相对抓力、双侧腓肠肌湿质量、肌纤维横截面积均显著增加(P＜0.05);血清中活性形式GDF8含量显著降低(P＜0.01);心率、心搏输出量、左心室射血分数及心室收缩功能无显著差异(P＞0.05).结论 抗GDF8单克隆抗体P249337具有良好的分子完整性和均一性,具有很强的抗原结合能力和体外中和活性,能显著促进骨骼肌生长,且对心脏功能无影响,为研发肌肉萎缩性疾病治疗用新型生物制剂奠定了基础.
关键词：GDF8单克隆抗体肌肉萎缩P249337杂交瘤技术C2C12细胞腓肠肌前肢抓力
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(82204259)
论文发表日期：2026-07-31
在线出版日期：2026-08-26（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 993-999,1007 )
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