Yip1域家族成员3/4介导高尔基体自噬缓解脂多糖诱导的T淋巴细胞凋亡
成鑫月1
樊琪2
陈钰2
邓碧涵2
石一清2
韩泽鑫3
吴瑶2
董宁2
张卉2
姚咏明4
1.325015 浙江温州,温州医科大学附属第一医院急诊医学中心2.100853 北京,解放军总医院医学创新研究部第四医学中心3.201601 上海,上海市松江区泗泾医院4.325015 浙江温州,温州医科大学附属第一医院急诊医学中心;100853 北京,解放军总医院医学创新研究部第四医学中心
摘要：目的 探究Yip1域家族成员3/4(YIPF3-YIPF4)介导的高尔基体自噬对脂多糖(LPS)诱导的T淋巴细胞凋亡的影响.方法 采用对数生长期的人T淋巴细胞白血病细胞系(Jurkat),将细胞分为 CON 组、LPS(1 μg/mL)24 h 组、LPS 48 h 组,进一步给予 LPS(1 μg/mL)联合布雷非德菌素A(BFA 0.1 μg/mL,BL组)或莫能菌素(MON 1 μg/mL,ML组)预刺激0.5 h模拟脓毒症时高尔基体应激条件(n=3).采用Western blot方法检测高尔基体应激相关蛋白(GOLPH3、GM130)、高尔基体自噬相关蛋白(YIPF3、YIPF4、LC3B)等表达水平.采用免疫荧光观察细胞中高尔基体自噬情况.利用慢病毒转染技术构建YIPF3-YIPF4基因过表达和YIPF3-YIPF4基因低表达Jurkat细胞.各转染组细胞给予LPS刺激24 h后,利用Western blot方法检测细胞凋亡相关蛋白表达水平,利用流式细胞术检测凋亡细胞比例变化(n=4).结果 与CON组比较,GOLPH3、GM130在LPS 24 h组中变化最显著(P＜0.05).电镜观察LPS刺激组细胞中高尔基体形态改变,表现为高尔基体膜囊堆叠结构松散.在进一步模拟脓毒症高尔基体应激实验中,与CON组比较,LPS组YIPF3、YIPF4表达上调,LC3B Ⅰ向LC3B Ⅱ的转化显著增加(P＜0.05);BL组YIPF3表达显著升高,ML组YIPF4表达显著升高,LC3的转化增强(P＜0.05).免疫荧光结果显示,与CON比较,LPS组细胞中YIPF3表达及其与溶酶体探针的共定位显著增强,BL组及ML组中共定位更加显著.调节YIPR3和YIPF4基因表达后,YIPF3-YIPF4 siRNA+LPS组细胞中剪切型Caspase-3和Bax蛋白表达高于NS+LPS组(P＜0.05),LV-RNA+LPS组低于NC+LPS组(P＜0.05);流式细胞术检测显示,YIPF3-YIPF4 siRNA+LPS组细胞凋亡率高于NS+LPS 组(P＜0.05),LV-RNA+LPS 组细胞凋亡率低于 NC+LPS 组(P＜0.05).结论 LPS刺激诱导T淋巴细胞发生显著的高尔基体应激,YIPF3-YIPF4介导的高尔基体自噬随之活化.促进YIPF3-YIPF4表达,可以显著缓解LPS诱导的T淋巴细胞凋亡.
关键词：脓毒症T淋巴细胞凋亡高尔基体自噬高尔基体应激
资助基金：国家自然科学基金(82241062)国家自然科学基金(82472194)国家自然科学基金(82130062)
论文发表日期：2025-11-10
在线出版日期：2025-12-09（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 936-942 )
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