农杆菌介导的马尔尼菲青霉基因转化技术的建立及优化
李鑫垒1
李昕2
曹存巍1
1.广西医科大学第一附属医院皮肤性病科,南宁,5300212.常德市第一人民医院皮肤性病科,常德,415000
摘要：目的：建立农杆菌介导的马尔尼菲青霉（PM）基因转化技术，并对该技术条件进行优化。方法以二元质粒pDHt／ SK 为载体，通过农杆菌介导将 pyrG 基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株 SPM4（pyrG?，niaD?）中，在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子。运用 PCR 验证重组子。进一步对影响转化效率的农杆菌类型、共培养浓度、转化媒介、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮（AS）等六个条件进行优化。结果 PCR 验证 pyrG 基因成功的插入 SPM4中，所得到转化子可稳定传代，通过条件优化，得到转化子约300个／106个细胞。选用 AGL?1，以农杆菌共培养浓度为 OD600＝0．8，AS 浓度为200μmol／ L，无膜 IM 固体共培养基为介质，25℃共培养48 h 为最适转化条件。结论成功建立了农杆菌介导 PM 基因转化技术，简化并优化了转化条件，该方法可用于 PM 基因功能研究。
关键词：马尔尼菲青霉农杆菌转化
分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81060128)国家自然科学基金(81271804)广西自然科学基金(0991144)广西自然科学基金(2012jjAA40175)卫生厅自筹项目(Z2007082)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 88-91 )
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