益肾喘宁汤调控哮喘细胞自噬、凋亡及焦亡机制研究
刘莹
王彤彤
董宇昂
安徽中医药大学,安徽 合肥 230012
摘要：目的 研究益肾喘宁汤调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人支气管气道上皮样细胞(human bronchial epithelial cells,16HBE)自噬及相关机制.方法 实验分为5组:正常组、模型组、中药组、地塞米松组、中药+地塞米松组.采用细胞计数试剂盒-8法(cell counting kit-8 assay,CCK-8)检测细胞增殖活力,筛选益肾喘宁汤最佳剂量;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法观察细胞受损状况;透射电镜观察自噬小体的形态变化;自噬双标腺病毒实验检测自噬流;TUNEL染色观察细胞凋亡率;免疫荧光检测胱天蛋白酶-1(cysteine-dependent aspartate-specific protease-1,Caspase-1)的表达;Western blot检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、Caspase-1、胱天蛋白酶-3(cysteine-dependent aspartate-specific protease-3,Caspase-3)、Beclin-1、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,Atg-5)的表达水平.结果 CCK-8实验结果显示,益肾喘宁汤冻干粉浓度为20%、培养48 h时效果最佳.透射电镜观察,正常组细胞形态正常,细胞膜完整,线粒体嵴结构清晰,自噬体数量较多;模型组线粒体形态正常,自噬体较少;中药组线粒体皱缩,嵴结构减少,膜密度增加,自噬体数量较模型组增多;地塞米松组线粒体肿胀,嵴结构减少,自噬体数量与中药组相似;中药+地塞米松组线粒体肿胀,嵴结构减少,自噬体数量较中药组进一步减少.自噬双标腺病毒实验显示,模型组的黄色斑点、自噬小体、溶酶体明显少于其他组,且黄色斑点少于红色斑点,表明自噬活性较低;中药组的红色和黄色斑点较正常组及中药+地塞米松组减少,提示自噬溶酶体及自噬小体形成受到抑制.LDH及炎症因子检测结果显示:与模型组相比,正常组、中药组、地塞米松组及中药+地塞米松组的LDH漏出率、IL-18、IL-1β、Caspase-1水平均显著降低(P<0.01);细胞凋亡率、Atg-5、Beclin-1、Caspase-3表达显著增加(P<0.01);与中药组相比,正常组及中药+地塞米松组的LDH漏出率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、Atg-5、Beclin-1、Caspase-3表达显著增加(P<0.01).结论 益肾喘宁汤可抑制人支气管气道上皮样细胞的存活,减少细胞自噬和焦亡,并促进细胞凋亡.
关键词：益肾喘宁汤支气管气道上皮样细胞细胞自噬细胞焦亡细胞凋亡
分类号：R285.5(中药学)R562.2(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：安徽省高等学校科学研究项目(2022AH050442)安徽中医药大学人才支持计划项目(DT2000000458)
论文发表日期：2025-11-20
在线出版日期：2026-07-17（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1-8 )
英文信息