DOI: 10.12187/2025.04.008
普通烟草NtASAT2的结构预测、克隆表达及功能验证
韩丽1
董滋强2
王丽娇2
李文钦2
王晨辉2
肖成志2
毛多斌1
1.郑州轻工业大学 食品与生物工程学院,河南 郑州 450001;郑州轻工业大学 烟草工业生物技术重点实验室,河南 郑州 4500012.郑州轻工业大学 食品与生物工程学院,河南 郑州 450001
摘要：为获得具有活性的普通烟草酰基糖酰基转移酶(NtASAT2),采取生物信息学方法对其序列及结构进行分析和预测,并对其基因进行克隆、原核表达与纯化,通过酶催化反应对获得的重组蛋白进行功能验证.结果表明:在NtASAT2 二级结构中,α-螺旋及无规则卷曲占比较大,分别为 39.04%和 41.13%,且NtASAT2的氨基酸序列与粘毛烟草 NacASAT2 高度相似;在原核细胞 BL21(DE3)表达的重组蛋白中,可溶性NtASAT2 含量较少,且NtASAT2 与镍柱的亲和力较弱,纯化后仅得到少量目标蛋白;在含有底物的酶催化反应体系中,NtASAT2 表现出酶活性并催化生成蔗糖二酯.该研究结果可为NtASAT2 在酶催化合成蔗糖酯方面的应用提供理论参考.
关键词：普通烟草酰基糖酰基转移酶蔗糖酯克隆表达与纯化
分类号：TS41+3(烟草工业)Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：中国烟草总公司重点研发项目(110202202006)
论文发表日期：2025-08-15
在线出版日期：2025-08-19（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 69-76 )
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