摘要：目的 探讨水飞蓟宾在抑制青光眼术后纤维化的作用及其分子机制.方法 体内动物实验:将25只健康新西兰兔随机分为对照组及不同浓度水飞蓟宾实验组(50、100、200、250 μmol/L),5只/组,左眼行小梁切除术后连续7 d进行结膜下注射.术后动态监测眼压和滤过泡形态(Krofeld分型),第28天取术眼组织进行HE、Masson染色,Fibronectin和Collagen I免疫荧光检测.体外实验:通过TGF-β1诱导兔Tenon囊成纤维细胞纤维化模型,结合Western blotting及流式细胞术分析水飞蓟宾对自噬(LC3II/LC3I、p62)与凋亡的调控作用.结果 术后7～21 d,不同浓度水飞蓟宾实验组兔眼压均低于对照组(P<0.05).200 μmol/L、250 μmol/L实验组兔眼压降低可维持至术后28 d(P<0.05).术后14～21 d,随着水飞蓟宾浓度升高,功能性滤过泡数形成率升高(P<0.05),200、250 μmol/L水飞蓟宾组在术后28 d仍保持40%以上的功能性滤过泡(P<0.05).HE和Masson染色显示,各实验组炎性细胞浸润程度和纤维细胞数量较对照组降低、胶原沉积呈浓度依赖性减少.免疫荧光实验显示,水飞蓟宾呈剂量依赖性减少Fibronectin与Collagen I阳性细胞数量(P<0.001).体外实验显示,水飞蓟宾逆转TGF-β1诱导的成纤维细胞纤维化表型(P<0.01),上调LC3II/LC3I比值(P<0.0001),降低p62表达(P<0.0001),并促进细胞凋亡(P<0.0001).结论 水飞蓟宾可明显抑制青光眼术后纤维化,可能是通过激活细胞自噬及诱导细胞凋亡双重机制减少成纤维细胞活化.

摘要：目的 探讨2周叶酸对8%高盐饮食(HS)诱导肾脏纤维化的保护作用.方法 将28只小鼠随机分为对照组(AIN-93G饲料)、高盐组(HS组,含8%NaCl的AIN-93G饲料)、低剂量叶酸组(LFA组,含8%NaCl的AIN-93G饲料+灌胃FA 0.56 mg·kg-1·d-1)和高剂量叶酸组(HFA组,含8%NaCl的AIN-93G饲料+灌胃FA 5.6 mg·kg-1·d-1),7只/组.记录小鼠体质量、摄食量、饮水量、尾动脉收缩压和心率变化.测定血清肌酐(SCr)和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平.采用HE、PAS、Masson和天狼星红染色观察肾脏组织学变化.检测Kim1,Vimentin,αSma及Ecadherin的mRNA表达及E-cadherin、Vimentin和α-SMA的蛋白表达.结果 与HS组相比,叶酸干预降低小鼠饮水量(P<0.05).叶酸干预可降低HS组小鼠尾动脉收缩压、心率及肾脏指数与血清SCr水平(均P<0.05).叶酸干预降低HS小鼠血清TNF-α,且降低IL-1β、IL-6水平(均P<0.05).Masson和天狼星红染色显示,HS+LFA组的肾小球和肾间质纤维化指数均下降(P<0.05),HS+HFA组纤维化指数下降(P<0.05).免疫组化结果显示,叶酸干预增加HS小鼠肾脏组织中E-cadherin蛋白表达并抑制Vimentin的蛋白表达(均P<0.05).低、高剂量的叶酸均可抑制HS所诱发肾脏纤维化相关标志物(Vimentin,Kim1和αSma)的mRNA和蛋白表达(均P<0.05),减少间质纤维组织堆积,改善肾脏组织纤维化的发生.叶酸干预同时可上调Ecadherin 的mRNA表达参与缓解肾脏纤维化的发生.结论 叶酸干预能够改善高盐饮食小鼠肾脏中炎症反应,延缓肾脏纤维化病变.低剂量叶酸的作用效果优于高剂量叶酸,其保护机制可能与调控Ecadherin,Kim1,Vimentin和αSma 的表达有关.

摘要：目的 探究珠子草素(Nir)对克罗恩病样结肠炎的作用与机制.方法 建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,2.5%)诱导的结肠炎小鼠模型,通过疾病活动度活动(DAI)评分、体质量改变、结肠长度、病理学检测评估结肠炎症状改变,AB-PAS、免疫荧光和免疫印迹评估肠屏障功能,TUNEL染色和免疫印迹评估细胞凋亡,流式细胞术分析肠系膜淋巴结中T淋巴细胞亚群(Th1/Th2)变化;ELISA检测TNF-α和IL-10表达水平变化.体外实验采用脂多糖诱导小鼠结肠类器官炎症模型,检测类器官出芽数及屏障蛋白表达.通过网络药理学和体内实验探索验证Nir拮抗结肠炎的潜在机制.结果 体内实验显示,Nir可改善TNBS诱导结肠炎小鼠体质量下降、DAI升高、结直肠缩短等表型,降低组织炎症评分,减少杯状细胞丢失(P<0.05)及肠上皮凋亡细胞数量.体外实验表明,Nir能增加结肠类器官出芽数目(P<0.05).免疫荧光和免疫印迹证实,Nir可恢复体内外实验结肠组织紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1)水平,下调促凋亡蛋白C-caspase3和BAX表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2(P<0.05);流式细胞术显示,Nir可降低小鼠肠系膜淋巴结Th1比例,升高Th2比例,改善Th1/Th2失衡,同时下调结肠组织TNF-α、上调IL-10水平(P<0.05);网络药理学预测Nir作用与PI3K/AKT通路相关;免疫印迹发现,Nir可下调p-PI3K、p-AKT和p-p65表达(P<0.05).并且PI3K/AKT通路激活剂Recilisib可逆转Nir拮抗肠上皮细胞凋亡和调节Th1/Th2平衡的作用.结论 Nir通过拮抗肠上皮细胞凋亡与调控Th1/Th2平衡来改善克罗恩病样结肠炎,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路活性,进而调控下游凋亡信号和炎症免疫分子表达有关.

摘要：目的 探究芪丹地黄颗粒中不同黄芪药对(黄芪丹参药对、黄芪地黄药对、黄芪山药药对)调节糖尿病肾病(DKD)小鼠PTGS2介导的脂质过氧化的不同影响.方法 通过网络药理学方法筛选芪丹地黄颗粒中黄芪、丹参、生地黄和山药的活性成分及其作用靶点,构建药对-有效成分-靶点网络,并与DKD相关靶点进行交集分析,构建PPI蛋白互作网络和富集分析.利用分子对接技术验证关键活性成分与PTGS2的结合能力.通过动物实验评估不同黄芪药对对DKD小鼠的影响.30只小鼠随机分为6组(n=5),包括正常对照组、模型组、厄贝沙坦组(50 mg/kg/d)及3个黄芪药对组(黄芪丹参、黄芪地黄、黄芪山药,给药剂量均为6 g/kg/d).除正常组外,其余各组采用链脲佐菌素(50 mg/kg)诱导DKD模型,造模成功后给予相应药物干预8周.结果 网络药理学结果显示芪丹地黄颗粒中各药对的活性成分与DKD相关靶点存在广泛交集,PTGS2为关键靶点.主要活性成分与PTGS2具有良好的结合亲和力.与模型组相比,黄芪-丹参组和黄芪-地黄组小鼠的体质量、空腹血糖、血清肌酐、尿素氮和24 h尿白蛋白水平改善(P<0.05),其中黄芪-丹参组改善最显著;而黄芪-山药组仅在血糖和肌酐水平方面有轻微改善(P<0.05),对尿素氮和尿白蛋白无统计学差异(P>0.05).PTGS2蛋白表达在模型组升高(P<0.01),黄芪-丹参组显著下调其表达(P<0.01).黄芪-丹参组显著提高SOD活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01)并上调GPX4表达(P<0.01);黄芪-地黄组改善作用相对较弱,黄芪-山药组效果最差.结论 芪丹地黄颗粒中3个黄芪药对可在一定程度上通过PTGS2介导的脂质过氧化改善糖尿病肾病,其中黄芪丹参药对效果最为显著.

摘要：目的 探讨刺芒柄花素(FMN)对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的神经保护作用,并阐明其机制是否与调控P53/SAT1/ACSL4信号通路以抑制神经元铁死亡有关.方法 选取24只出生9～11 d的C57BL/6J新生小鼠,通过结扎左侧颈总动脉并置于低氧环境(92%N2,8%O2)中40 min以构建HIBD模型.造模成功后,将小鼠随机分为4组(n=6):假手术组(Sham)、模型组(HIBD)、FMN低剂量治疗组(HIBD+FMN-L,50 mg/kg)和高剂量治疗组(HIBD+FMN-H,100 mg/kg).腹腔注射给药,3 d后取脑皮层缺血半暗带组织进行检测.采用Western blotting和双重免疫荧光技术分析铁死亡通路关键蛋白P53、SAT1及ACSL4的表达水平;同时测定组织内亚铁离子(Fe²+)、超氧化物(DHE)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,以评估铁死亡及相关氧化应激指标.体外选用HT22神经元,建立氧糖剥夺(OGD)模型并分组为:对照组(Control)、模型组(OGD)、FMN干预组(OGD+FMN,100 μmol/L)、P53激动剂Nutlin-3干预组(OGD+Nutlin-3,10 μmol/L)以及FMN与Nutlin-3联合处理组(OGD+FMN+Nutlin-3).在药物预处理1 h及OGD处理6 h后,检测上述铁死亡相关蛋白,并利用特异性探针或生化方法评估细胞内Fe²+(FerroOrange)、活性氧(DCFH-DA)、脂质过氧化(BODIPY-C11、MDA)、GSH水平、线粒体膜电位(JC-1)及细胞活性(CCK-8).结果 体内实验结果表明,与HIBD组相比,FMN治疗能够显著抑制P53、SAT1和ACSL4的蛋白表达(P<0.05),并有效改善铁死亡相关生化指标,具体为Fe²+、ROS和MDA含量显著降低,同时抗氧化物质GSH水平得以恢复(P<0.05).体外实验结果与体内发现相互印证,FMN处理缓解了OGD诱导的HT22细胞铁死亡,表现为铁死亡关键蛋白表达下调(P<0.05),Fe²+积聚、脂质过氧化和ROS水平受到抑制,并且GSH含量、线粒体膜电位及细胞活力得到显著改善(P<0.05).机制验证方面,当使用Nutlin-3特异性激活P53信号后,FMN所产生的上述保护效应均被明显逆转或削弱(P<0.05),P53信号在FMN抑制铁死亡过程中发挥重要的上游调节作用.结论 刺芒柄花素通过下调P53/SAT1/ACSL4通路介导的神经元铁死亡的途径,对新生小鼠HIBD产生神经保护效应.

摘要：目的 探讨活血清解灵(HXQJL)通过调控沉默信息调节因子1(Sirt1)信号通路介导的自噬改善胆管结扎(BDL)诱导的肝纤维化.方法 采用BDL处理SD大鼠,并随机分为:假手术组(Sham)、模型组(BDL)、活血清解灵低、高剂量组(HXQJL-L、HXQJL-H),Sirt1抑制剂Ex527组(EX527),活血清解灵联合Ex527组(HXQJL+EX527).HE和天狼星红染色观察肝组织病变和胶原沉积变化;生化检测血清ALT、AST、ALP和GGT水平.RT-PCR 和Western blotting法分别检测α-SMA、FN、COL I、Atg 5、Beclin1、p62、LC3B和Sirt1 的表达.免疫荧光检测α-SMA、LC3B和Sirt1的表达.结果 与Sham组比较,BDL组肝细胞损伤、炎细胞浸润及胶原沉积面积增多(P<0.05),血清中ALT、AST、ALP、GGT水平增加(P<0.05).同时肝组织中α-SMA、FN、COL I、Atg 5和Beclin1表达增加,LC3B-II/I比值增加(P<0.05),而p62和Sirt1表达降低(P<0.05).与BDL组相比,活血清解灵各剂量组肝细胞损伤、炎细胞浸润及胶原沉积面积减少(P<0.05),ALT、AST、TBA、ALP水平降低(P<0.05),肝组织中α-SMA、FN、COL I、Atg 5和Beclin1表达降低(P<0.05),LC3B-II/I比值降低,而p62和Sirt1表达增加(P<0.05);而Ex527组肝细胞损伤、炎细胞浸润及胶原沉积面积增多(P<0.05),ALT、AST、TBA、ALP水平升高(P<0.05),肝组织中α-SMA、FN、COL I、Atg 5和Beclin1表达升高,LC3B-II/I比值升高(P<0.05),而p62和Sirt1表达降低(P<0.05).与HXQJL-H组相比,Ex527可以阻断活血清解灵对大鼠肝组织损伤、肝功能、肝纤维化和自噬的作用.结论 活血清解灵通过调控Sirt1-自噬信号通路对胆管结扎诱导肝纤维化具有保护作用.

摘要：目的 评价硒代胱氨酸(SeC)体外抑制结肠癌细胞生长的分子机制.方法 体外培养RKO、HCT-116、LoVo结肠癌细胞,SeC处理细胞24 h和48 h,分为正常对照组和SeC低、中、高剂量组(SeC为5、10、20 μmol/L).MTT检测结肠癌细胞的活性.划痕实验检测结肠癌细胞迁移能力.流式细胞仪PI染色检测细胞周期阻滞和凋亡情况.荧光探针检测自由基产生、线粒体结构和膜电位变化.铁死亡标志物如丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、亚铁离子(Fe2+)分析铁死亡的水平,Western blotting检测蛋白表达情况.结果 SeC低、中、高剂量组均抑制结肠癌细胞增殖和迁移(P<0.05);SeC不同剂量处理组中细胞周期相关蛋白CDK2、CDK4表达下调,并且凋亡蛋白PARP和Caspase9发生活化(P<0.05);此外,Western blotting结果显示SeC诱导铁死亡蛋白FTH1,xCT表达下降和DMT1表达升高;SeC不同剂量处理组中MDA,Fe2+水平增加和GSH水平降低(P<0.05).荧光结果显示线粒体结构损伤、活性氧(ROS)生成增多;Western blotting结果显示氧化损伤蛋白的磷酸化表达升高和NRF2/HO-1蛋白表达下调(P<0.05);ROS清除剂显著逆转结肠癌细胞中SeC对DMT1、PARP、p-H2A.X蛋白的上调作用(P<0.05).结论 SeC可通过诱导ROS生成启动氧化应激损伤诱导结肠癌细胞凋亡和铁死亡,进而抑制结肠癌细胞生长,是结肠癌潜在的化疗剂.

摘要：目的 探讨柴胡疏肝散加减对胆囊胆固醇结石(CS)肝郁证模型小鼠的治疗作用及其可能通过调节肠道菌群与胆汁酸代谢发挥作用的机制.方法 将60只6周龄C57BL/6雄性小鼠按体质量分区间法随机分为空白组(n=9)、模型组(n=51),模型组小鼠予2%高脂致石饲料喂养8周,建立CS小鼠模型.8周CS造模后随机取3只模型组小鼠查看胆囊结石情况,将剩余48只小鼠分为CS组、CS肝郁组、柴胡疏肝散组及熊去氧胆酸组,12只/组.除CS组外,其余3组采用"慢性不可预见性温和应激(CUMS)+孤养"法建立CS肝郁证小鼠模型,柴胡疏肝散组、熊去氧胆酸组分别予柴胡疏肝散加减和熊去氧胆酸浓缩液(0.02 mL/g)灌胃,其余组灌胃等量生理盐水,连续干预3周.观察肝郁证造模期间小鼠一般情况及体质量变化;造模前后对各组小鼠进行行为学实验;HE染色观察回肠组织病理学变化;ELISA检测胆汁中总胆固醇、总胆汁酸含量;q-PCR检测回肠组织中G蛋白偶联胆汁酸受体GPbar1(TGR5)、胰高血糖素样肽-1/2的mRNA表达;16SrDNA测序与代谢组学检测小鼠粪便与肠内容物的微生物多样性与胆汁酸.结果 与空白组及CS组比较,CS肝郁组小鼠体质量下降(P<0.01),渐趋淡漠懒动、反应迟钝;行为学指标显示旷场移动总距离、中心停留时间、糖水消耗减少(P<0.05),游泳、悬尾不动时间增加(P<0.05);胆囊体积胀大、结石晶体明显,胆汁浑浊;肠绒毛变短、肠道形态破坏;胆汁总胆固醇含量增高(P<0.05)、总胆汁酸含量降低(P<0.05);肠GLP1/2、TGR5的mRNA表达均升高(P<0.01).与CS肝郁组相比,柴胡疏肝散加减组小鼠体质量升高(P<0.05);行为学指标显示旷场移动总距离、中心停留时间、糖水消耗增加(P<0.05),游泳、悬尾不动时间减少(P<0.05);胆囊体积缩小、结石晶体减少、胆汁清透;上述肠、胆囊病理改变恢复;胆汁总胆固醇降低(P<0.01)、总胆汁酸增高(P<0.05);肠GLP1/2、TGR5的mRNA表达降低(P<0.01).肠道菌群检测显示,结石组和结石肝郁组的ace指数、Shannon指数降低(P<0.01);疣微菌门及其主要菌属阿克曼氏菌属在CS组、CS肝郁组相对丰度上调(P<0.01),拟杆菌门及其主要菌属Muribaculaceae在CS组下调(P<0.01);胆汁酸谱分析显示,CS组牛磺脱氧胆酸、脱氧胆酸、甘脱氧胆酸上调(P<0.05),CS肝郁组胆酸、3-酮脱氧胆酸上调;相关性分析显示,促石胆汁酸与有害菌正相关,脱氧胆酸与扭瘤胃球菌群、毛螺菌科丰度呈正相关(P<0.05);甘脱氧胆酸、GCA、牛磺脱氧胆酸与土里肠杆菌属、扭瘤胃球菌群丰度呈正相关(P<0.01).结论 柴胡疏肝散加减可以改善胆囊胆固醇结石肝郁证模型小鼠肝郁程度和结石程度,其机制可能与改善肠道菌群紊乱及胆汁酸代谢有关.

摘要：目的 通过检测急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者在直接经皮冠状动脉介入治疗(PPCI)术前及术后血清GSDMD蛋白表达水平,评估其对30 d主要不良心血管事件(MACE)的预测效能,并结合临床指标构建列线图预测模型.方法 选取2024年6月～2025年5月在我院接受PPCI的100例STEMI患者进行前瞻性分析.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者术前和术后第2天清晨血清中GSDMD蛋白表达水平,并同步收集患者基线临床资料和实验室指标.采用Wilcoxon符号秩检验比较患者术前与术后血清GSDMD的水平变化.根据术后GSDMD水平通过约登指数确定最佳截断值,将患者分为高GSDMD组和低GSDMD组,随访30 d,记录两组患者术后30 d内MACE的发生情况.MACE定义包括再发心肌梗死,新发心力衰竭或心力衰竭加重再入院,恶性心律失常,通过临床症状和头颅CT或MRI诊断的缺血性卒中,全因死亡,以及非计划的血运重建.根据是否发生MACE分为MACE组(n=26)与非MACE组(n=74).采用单因素Logistic回归初步筛选差异变量,继而通过LASSO回归进行变量降维,最终通过多因素Logistic回归确定独立预测因子,基于回归系数建立列线图模型,并通过ROC曲线、Bootstrap验证、Hosmer-Lemeshow拟合优度检验、校准曲线和决策分析曲线(DCA)评价预测模型的预测效能、拟合度和临床应用价值.结果 STEMI患者术后GSDMD水平较术前升高(Z=-4.848,P<0.001).PPCI术后血清GSDMD表达高的STEMI患者发生短期MACE事件的风险增加(P=0.01).经过单因素Logistic分析、多重共线性诊断、LASSO回归、多因素Logistic校正后确定PPCI术后血清GSDMD水平是STEMI患者30 dMACE的独立危险因素.通过多因素Logistic回归分析筛选出关键参数建立列线图预测模型,最后将Killip分级、支架个数、白蛋白、GSDMD纳入模型,ROC曲线分析结果显示,模型预测STEMI患者30 d内MACE的AUC为0.847(P<0.001,95%CI=0.759-0.936),灵敏度为84.6%,特异度为79.7%.Bootstrap校正、Hosmer-Lemeshow拟合优度检验、校准曲线和DCA均证实了模型的预测效能.结论 PPCI术后血清GSDMD升高是STEMI患者30 d内MACE的独立危险因素,以此构建的预测模型对STEMI患者30 d内MACE的发生具有较好的预测价值.

摘要：目的 探究益气解毒方对Hep3B肝癌小鼠模型中免疫微环境的调控机制.方法 选取40只SPF级雄性小鼠,小鼠腋下注射Hep3B肿瘤细胞,建立异位小鼠模型,将小鼠随机分为模型组(生理盐水0.2 g/kg),华蟾素片组(0.22 g/kg),益气解毒方低(0.5 g/kg)、中(1 g/kg)、高(2 g/kg)剂量组,8只/组.连续灌胃给药28 d,每7 d记录各组小鼠瘤重、体积.给药结束后计算抑瘤率,通过HE染色观察小鼠肿瘤组织病理变化,流式细胞术检测肿瘤组织中M1/M2型巨噬细胞极化比例,免疫荧光术检测CD86、CD206蛋白表达,Western blotting检测小鼠瘤体组织中iNOS、Arg-1、p65、p50蛋白表达,q-PCR检测iNOS、Arg-1、p65、p50 mRNA表达,ELISA法检测血清IL-4、IL-6、IL-10、INF-γ、TNF-α、TGF-β1水平.结果 与模型组比较,益气解毒方各组小鼠肿瘤质量、体积减小;肿瘤细胞数量减少,细胞核缩小,坏死区域增大;M1型巨噬细胞比例升高,M2型巨噬细胞比例降低;肿瘤组织中CD86表达上升,CD206表达下降;iNOS、Arg-1、p65、p50蛋白及mRNA表达降低;血清IL-4、IL-10、TNF-α、TGF-β1水平降低,IL-6、INF-γ水平升高(P<0.05).结论 益气解毒方能有效抑制Hep3B肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长,逆转肿瘤相关巨噬细胞的极化状态,将M1/M2比例从M2主导调整至M1主导,从而改善肿瘤免疫抑制微环境,增强抗肿瘤效应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的过度激活有关.

摘要：目的 探究宽缨酮(EN)减轻缺血再灌注(IR)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)的作用机制.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为Sham、IR及EN低、高剂量组4组(6只/组).双侧肾蒂IR处理构建AKI模型,EN低、高剂量组在术前2 d腹腔注射EN(0.25、1.0 mg·kg-1·d-1)直至组织取材前1 d.采用网络药理学分析EN作用通路和分子机制,采用分子对接分析EN与靶点的结合性能.检测小鼠肾功能、肾组织病理、肾小管损伤指标(KIM-1、NGAL)、p-STAT3、p-PI3K及p-JAK2的表达、EN与STAT3相互作用、炎症及线粒体生物发生及其功能.另将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为:Sham、IR、IR+EN和IR+EN+ML115(STAT3激动剂)组4组(6只/组),分析STAT3在EN减轻IR诱导的AKI中的作用机制.结果 低、高剂量EN均减轻小鼠肾组织损伤、改善肾功能,包括降低血肌酐、尿素氮、肾小管损伤评分及下调KIM-1和NGAL的表达(P<0.05).网络药理学分析发现EN核心靶点富集信号通路与炎症密切相关.低、高剂量EN均降低AKI小鼠肾组织炎症因子(IL-6、MCP-1、TNF-α)的水平及肾间质巨噬细胞浸润(P<0.05),增加肾组织ATP含量及线粒体DNA拷贝数(P<0.05),并上调PGC-1α、TFAM、Nrf2的基因表达以及PGC-1α、TOM20的蛋白表达(P<0.05).基于分子对接结果筛选出STAT3和PI3K为EN减轻AKI的关键靶点.动物实验结果显示,EN抑制AKI小鼠肾组织p-STAT3和p-PI3K表达(P<0.05),但不影响p-JAK2的表达(P>0.05).表面等离子共振实验证实EN特异性结合STAT3.ML115可逆转EN对AKI小鼠的肾功能、肾组织病理损伤、肾小管损伤及炎症反应的保护作用(P<0.05).结论 EN通过靶向抑制STAT3促进线粒体生物发生,减轻肾脏线粒体功能损伤及炎症反应,从而缓解IR诱导的AKI.

摘要：目的 探讨盐酸甲氟喹(MQ)对X射线照射所致肺上皮细胞DNA损伤的保护作用.方法 实验将人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)分为空白对照组、空白对照+MQ组、单纯照射组、照射+MQ处理组;利用CCK-8实验、EdU-488实验、细胞克隆形成实验观察MQ对X射线照射后细胞增殖和放射敏感性的影响;通过流式细胞术检测不同条件处理BEAS-2B细胞的凋亡及细胞周期情况;通过细胞免疫荧光实验、彗星电泳观察MQ对BEAS-2B细胞DNA双链断裂(DSB)损伤修复的调控功能;利用Western blotting、qPCR和荧光素酶实验研究MQ调控DSB损伤修复的作用机制.结果 CCK-8结果显示MQ 0～40 μmol/L范围内,0～10 μmol/L对BEAS-2B细胞活力无明显抑制作用.与单纯照射组相比,10 Gy照射联合不同浓度(1～10 μmol/L)处理均能增强细胞活力,且10 μmol/L时细胞活力最高,故被选取为后续实验浓度;MQ处理能提高照射后BEAS-2B细胞增殖能力(P<0.05)和克隆形成率(P<0.05),降低辐射敏感性;同时单纯照射组细胞凋亡率为(17.43±0.51)%,而照射+MQ处理组细胞凋亡率降低至(14.03±0.45)%(t=8.621,P<0.05);细胞周期检测发现,单纯照射导致G2/M期阻滞,MQ可缓解由4Gy照射导致的细胞G2/M期阻滞(P<0.05);彗星实验和免疫荧光实验显示,与空白对照组相比,空白对照+MQ处理组的彗星尾矩与γH2AX foci差异无统计学意义;而照射+MQ处理组的彗星尾矩(P<0.05)和γH2AX foci形成数量(P<0.01)均较单纯照射组降低,DSB修复效率提高;Western blotting 实验与qPCR实验显示,与空白对照组相比,MQ处理BEAS-2B细胞48 h后,能够促进CtIP启动子活性(P<0.05),从而在mRNA和蛋白水平上上调CtIP的表达.结论 MQ通过上调CtIP表达,促进BEAS-2B的DSB修复能力,进而减轻辐射诱导的肺上皮细胞损伤.

摘要：目的 探讨唾液链球菌来源胞外囊泡(SS-EVs)对自然杀伤(NK)细胞活化功能的调控作用及其在系统性红斑狼疮(SLE)疾病进展中的潜在机制.方法 收集35例SLE患者及38例健康对照者的临床样本,检测其外周血T细胞、B细胞及NK细胞的数量与比例.提取患者粪便DNA,通过PCR扩增出唾液链球菌DNA片段,并通过琼脂糖凝胶电泳评估其丰度水平.采用超速离心技术分离SS-EVs,并通过透射电镜、纳米颗粒追踪分析和Western blotting对其进行表征.将SS-EVs与NK细胞共培养,通过定量聚合酶链式反应(qPCR)及流式细胞术体外检测NK细胞的活化状态及其细胞毒功能;将24只MRL/lpr小鼠随机分成3组,8只/组,每次分别灌胃100 μL PBS、100 μL含20 μg的E.coli-EVs和SS-EVs,通过HE染色、免疫荧光及ELISA评估肾脏病理改变、免疫复合物沉积及外周炎症因子水平,从而评估SS-EVs对狼疮性肾炎的影响.结果 SLE患者外周血中NK细胞数量与比例下降(P<0.0001),粪便中SS丰度升高,且与SLEDAI评分呈正相关(R2=0.8369).体外研究显示,SS-EVs上调NK细胞表面激活性受体的表达(P<0.01),增强其对靶细胞的杀伤效能;体内实验发现,SS-EVs可加剧小鼠肾组织炎症反应,促进C3和IgG免疫复合物沉积,升高血清中IL-6、TNF-α、IL-8及CCL20等炎症因子水平(P<0.05).结论 SLE患者的肠道中唾液链球菌富集,并通过释放SS-EVs促进NK细胞毒性功能的增强,诱导肾脏炎症反应及免疫复合物沉积,从而加重SLE的疾病进展.SS及其胞外囊泡可能为SLE的防治提供全新的靶向策略.

摘要：目的 探讨薤白来源的碳量子点(CQDs)通过不同给药方式(口服与腹腔注射)对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠模型的保护作用及其潜在机制.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、AKI模型组、腹腔注射给药组(AKI+CI)和口服给药组(AKI+CO),6只/组.除对照组外,其余3组小鼠于第3天单次腹腔注射顺铂(20 mg/kg)造模,AKI+CI组连续5 d腹腔注射薤白CQDs(0.25 mL/d),AKI+CO组灌胃给予薤白CQDs溶液(1 mL/d).第6天收集血样检测血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN);HE染色和透射电镜(TEM)评估组织病理结构、线粒体形态与足细胞损伤;RT-qPCR与Western blotting检测KIM-1、NGAL及炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)的表达水平.结果 与对照组相比,AKI组小鼠体质量明显下降、肾脏体积增大,肾重比升高,血清CRE和BUN水平均升高(P<0.01).与AKI组相比,各给药组小鼠体质量下降趋势明显缓解,肾重比、血清CRE和BUN水平均下降(P<0.05),肾损伤标志物KIM-1、NGAL以及炎症因子表达水平降低(P<0.05),肾组织结构完整,炎症细胞浸润减少,线粒体形态基本恢复,足细胞足突融合现象和基底膜增厚明显减轻,线粒体损伤和肾小球屏障结构破坏减轻,且AKI+CI组更为明显.结论 薤白CQDs通过腹腔注射可有效减轻顺铂诱导的急性肾损伤,改善肾功能,抑制炎症反应并修复线粒体损伤.薤白CQDs经腹腔注射途径给药具有更佳的靶向性与肾保护作用.

摘要：目的 基于生物信息学与机器学习法,筛选骨关节炎中与胞葬作用相关的关键基因,探讨其诊断价值、免疫微环境特征及潜在中药治疗靶点.方法 从GEO数据库获取骨关节炎数据集GSE55235、GSE55457和GSE117999,其中GSE55235作为训练集,GSE55457和GSE117999作为验证集.从GeneCards数据库获取胞葬相关基因集.通过差异表达分析筛选骨关节炎差异基因,并与胞葬基因取交集获得胞葬相关差异基因.对差异基因进行GO和KEGG富集分析.采用随机森林、LASSO回归和SVM三种机器学习算法筛选特征基因,并通过ROC曲线评估其诊断效能.通过qRT-PCR实验在大鼠骨关节炎模型中验证特征基因表达,利用CIBERSORT解析免疫细胞浸润情况,采用GSEA分析特征基因相关通路,运用Coremine数据库预测与特征基因相关的中药.结果 共筛选出959个OA差异基因,其中15个与胞葬作用相关.GO和KEGG分析显示这些基因主要富集于白细胞迁移、细胞外基质、炎症通路等.机器学习筛选出UCP2、EGLN3和IL1B三个特征基因,其在训练集和验证集中均表现出良好的诊断能力.qRT-PCR显示部分特征基因表达趋势存在差异(P<0.05).免疫浸润分析显示静止肥大细胞、休眠记忆CD4+T细胞和活化的肥大细胞在骨关节炎患者和健康人群的浸润差异显著(P<0.05).GSEA提示特征基因与脂肪细胞因子信号通路、硫代谢和剪接体通路密切相关.中药预测获得100味中药,以补虚、清热、活血化瘀类为主,包括枸杞子、淫羊藿、生地黄、苦参、川芎、牛膝等.结论 胞葬相关基因在骨关节炎发病中起重要作用,UCP2、EGLN3、IL1B基因对骨关节炎具有诊断价值,预测出的枸杞子、淫羊藿、生地黄、苦参、川芎、牛膝等中药可能是防治骨关节炎的潜在药物.

摘要：目的 探索牙本质涎磷蛋白(DSPP)对结直肠癌奥沙利铂治疗效果的影响,及其作用机制,评估靶向DSPP对结直肠癌的治疗疗效.方法 将奥沙利铂耐药HCT8细胞(OxR/HCT8)、结直肠癌类器官(PDTOs)、HCT116及SW620细胞设为sgNC对照组与sgDSPP敲除组,以CCK-8实验检测敲除DSPP后细胞对奥沙利铂的敏感性;将HCT116、SW620细胞设为sgNC、sgDSPP敲除组,Caco2及HCT8细胞设为oeNC对照、oeDSPP过表达组、oeDSPP过表达+Cyclo(整合素αvβ3抑制剂)组,Western blotting验证OxR/HCT8中 DSPP的表达水平,DSPP过表达、敲除细胞株构建以及对MAPK信号通路的调控.体内实验:采用4～5周龄BALB/c-nu裸鼠构建皮下成瘤模型,随机分3组(5只/组):Glu对照组、L-OHP(奥沙利铂)组、L-OHP+α-DSPP(DSPP单克隆抗体)联合组,验证联合治疗疗效.构建结直肠癌PDX模型,其中3例以4～5周龄NOD-SCID小鼠分4组(5～6只/组):Glu组、α-DSPP组、L-OHP组、L-OHP+α-DSPP组,验证靶向DSPP对奥沙利铂敏感性的影响;其余2例分6组(4～6只/组),新增Cyclo组及L-OHP+Cyclo组,对比靶向DSPP与整合素αvβ3的作用差异.免疫荧光染色、Co-IP、免疫组织化学染色实验分析DSPP与整合素αvβ3相互作用;HE染色及免疫荧光实验验证类器官模型的成功构建;免疫组织化学染色分析DSPP在结直肠癌奥沙利铂治疗敏感与耐药患者中的表达强弱.结果 免疫组织化学染色结果显示,与对奥沙利铂敏感结直肠癌患者相比(n=30),DSPP表达水平在奥沙利铂耐药患者(n=30)中显著升高(P<0.001);OxR/HCT8细胞中DSPP表达上调,并且在OxR/HCT8细胞、CRC类器官模型、HCT116以及SW620细胞中敲除DSPP均能增加奥沙利铂敏感性;Co-IP及免疫荧光实验证实肿瘤细胞DSPP与整合素αvβ3二者间具有相互结合及共定位;免疫组织化学染色发现结直肠癌患者肿瘤组织中DSPP表达较高时,整合素αvβ3表达水平也相对较高;DSPP可以上调MAPK信号通路中ERK及P53的磷酸化水平,而整合素αvβ3抑制剂能有效逆转DSPP的这一调控作用;裸鼠及PDX模型证实靶向DSPP及整合素αvβ3可以抑制肿瘤的生长(P<0.05),减小肿瘤的重量(P<0.05),增加结直肠癌奥沙利铂疗效(P<0.05),而DSPP单克隆抗体的促进作用优于αvβ3靶向抑制剂.结论 DSPP通过整合素αvβ3调控结直肠癌奥沙利铂耐药的新机制,确立DSPP有望成为提高晚期结直肠癌患者对奥沙利铂治疗敏感性的新靶点.

摘要：目的 探讨石菖蒲挥发油(VOA)通过TLR4/MyD88/NF-κB通路调控小胶质细胞(MG)抗抽动的机制.方法 48只3周龄SD大鼠,随机分为空白组(n=8)和模型制备组(n=40),采用腹腔注射亚氨基二丙腈诱导TD模型,将模型制备组大鼠随机分为模型组、硫必利组(47.91 mg/kg)、VOA组(51.12 mg/kg)、TAK-242组(3 mg/kg)和VOA+TAK242组(51.12 mg/kg+3 mg/kg),每组8只,1次/d,干预28 d.干预结束后,评估大鼠行为学变化情况,采用尼氏染色观察纹状体神经元形态改变,ELISA法检测大鼠血清、纹状体中TNF-α、C1q、TGF-β、VEGF含量,RT-PCR、Western blotting法检测观察大鼠纹状体中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白的表达情况,免疫细胞荧光染色检测NF-κB p65入核情况、MG特异性标志物Iba1、M1型、M2型标记蛋白CD86、CD206的表达水平.结果 与模型组相比较,VOA组大鼠抽动样行为评分降低(P<0.01),纹状体神经元损伤改善;血清及纹状体中TNF-α、C1q水平降低(P<0.01)、TGF-β、VEGF水平升高(P<0.01);纹状体中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量水平降低(P<0.01),NF-κB p65 入核减少(P<0.05),Iba1、CD86相对荧光强度减弱(P<0.01),Iba1、CD206相对荧光强度增强(P<0.01).结论 VOA通过降低MG的活化及极化状态,进而抑制脑内炎症水平改善抽动症状,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路有关.

摘要：目的 运用113种机器学习方法并基于酒精暴露相关基因构建并验证股骨头坏死诊断模型.方法 从GEO数据库中获取酒精暴露和股骨头坏死相关的转录组学数据,进行系统分析以开发和验证股骨头坏死诊断模型.合并数据集并去除批次效应后,进一步进行差异基因分析,确定酒精暴露和股骨头坏死的差异表达基因(DEGs)并取交集.对取得的交集DEGs 进行功能富集分析.采用单样本基因集富集分析(ssGSEA)对免疫浸润情况进行量化分析.在训练集上探索12种机器学习算法的113种组合,并采用10折交叉验证,构建ONFH的诊断模型,在测试集上进行验证.将MC3T3-E1细胞分为对照组和酒精组,通过qRT-PCR检测两组细胞中构建模型的差异基因表达,以验证构建模型的可靠性.利用"Enrichr"平台来识别ONFH的潜在药物.结果 总共鉴定出21个酒精暴露和股骨头坏死均密切相关的交集DEGs,基于富集分析,这些基因亦有参与免疫过程.通过免疫浸润分析显示,与健康对照组相比,酒精暴露和股骨头坏死患者体内免疫细胞浸润情况存在明显差异.接着,构建了由8个基因(SOAT1、GMCL1、GMPR、CISD2、ST3GAL6、AHSP、UBL3、PTPN12)组成的可靠的诊断模型,并进一步通过qRT-PCR验证发现,这8个基因在对照组和酒精组MC3T3-E1细胞中表达存在显著差异(P<0.05).最后,预测了10个可能靶向治疗股骨头坏死的潜在药物.结论 通过整合生物信息学分析和机器学习方法,并基于酒精暴露和股骨头坏死共有的DEGs,构建出可用于诊断股骨头坏死的可靠的模型.

摘要：目的 对比新型Ti-3Zr-2Sn-3Mo-25Nb β钛合金与传统Ti-6Al-4V钛合金椎弓根钉棒固定系统在后路腰椎椎体间融合术(PLIF)中的生物力学差异.方法 通过体外力学测试评估β钛合金螺钉、连接棒以及二者组成的固定系统抵抗弯曲、拉伸、压缩以及扭转载荷的力学性能.构建两种PLIF有限元模型,从而比较Ti-6Al-4V与β钛合金钉棒固定系统对活动度(ROM)、终板以及植入物应力的影响.结果 体外力学测试显示,β钛合金螺钉具有良好的抗弯曲(455.95±18.66 N)与扭转(9.03±0.20 N·m)性能.β钛合金棒可负载最大拉力为17647.06±101.89 N.β钛合金钉棒系统负载最大压力为417.65±5.09 N、最大扭矩为25.00±0.70 N·m.与Ti-6Al-4V相比,β钛合金模型中ROM增加2.6%～8.3%,椎间植骨、椎间融合器、终板的峰值应力分别增加1.4%～8.5%、2.2%～9.4%、2.2%～10.1%,骨-螺钉界面、钉棒系统的峰值应力分别降低8.8%～23.7%、19.0%～33.1%.结论 β钛合金椎弓根固定系统具有良好的体外力学性能,它可能提供与传统Ti-6Al-4V固定系统相似的稳定性,同时明显降低钉棒系统的应力集中.新型Ti-3Zr-2Sn-3Mo-25Nb β钛合金椎弓根钉棒固定系统具有良好的应用潜力.

摘要：目的 探讨生脉散改善非小细胞肺癌奥希替尼耐药的作用和机制.方法 制备大鼠含药血清,单用或联合奥希替尼处理人肺癌细胞A549检测细胞活力的变化,试剂盒检测细胞葡萄糖和乳酸含量变化,构建小鼠皮下肺癌模型,观察生脉散联合奥希替尼使用对奥希替尼体内抗肺癌活性的影响.Western blotting、RT-qPCR和免疫荧光实验检测生脉散和乳酸对Wnt/β-catenin/LDHA信号通路的影响.结果 生脉散以浓度依赖性增加A549细胞对奥希替尼的药物敏感性,与单用奥希替尼组比较,生脉散联合奥希替尼抑制细胞活力(P<0.001),克隆形成(P<0.001)和肺癌细胞体内增长(P<0.05),生脉散呈剂量依赖性减少A549细胞葡萄糖和乳酸含量(P<0.05).Western blotting结果显示生脉散抑制LDHA、β-catenin总蛋白、细胞质和细胞核β-catenin蛋白表达(P<0.01),而乳酸则激活β-catenin总蛋白、细胞核β-catenin和LDHA蛋白表达(P<0.001);免疫荧光结果显示乳酸激活β-catenin蛋白核积累,而生脉散抑制细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR结果显示乳酸激活Wnt/β-catenin下游靶基因(c-myc、CD44、Axin2、Oct3/4、Survivin和CCND1)的表达(P<0.05),而生脉散则抑制其表达(P<0.05).结论 生脉散抑制肺癌细胞乳酸/Wnt/β-catenin/LDHA通路,抑制糖酵解水平,改善非小细胞肺癌奥希替尼耐药.